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兔(Rabbit)弓形蟲(Tox/Toxo) ELISA檢測(cè)試劑盒

時(shí)間:2022-01-26 16:39:35      
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檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被弓形蟲抗原(Tox)的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中弓形蟲(Tox/Toxo)的存在與否。

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試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

陰性對(duì)照

0.5mL

0.5mL

陽性對(duì)照

0.5mL

0.5mL

檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

樣本稀釋液

6mL

3mL

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個(gè)

1個(gè)

 

操作步驟

  1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  2.設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔,陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各50μL;

  3.待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;

  4.隨后陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

  6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

  7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。


結(jié)果判斷

 1.  試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;

                陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值(Cut off)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

4.  陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性


試劑盒性能

1.準(zhǔn)確性:陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00;陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗(yàn)結(jié)果有效。

2.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

4.貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

5.有效期:6個(gè)月


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