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小鼠(Mouse)磷脂酶D(PLD) ELISA檢測試劑盒

時間:2022-01-22 16:57:07      
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小鼠(Mouse)磷脂酶D(PLD)檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被磷脂酶D(PLD)抗體的包被微孔. 中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的磷脂酶D(PLD)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品活性。

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小鼠(Mouse)磷脂酶D(PLD)試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、15、30、60、120、240 U/L


小鼠(Mouse)磷脂酶D(PLD)操作步驟

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.   樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

4.   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。


小鼠(Mouse)磷脂酶D(PLD)結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。


小鼠(Mouse)磷脂酶D(PLD)試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2. 靈敏度:最低檢測濃度小于1.0 U/L。

3. 檢測范圍:1.0 - 240 U/L。

4. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

5. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

6. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

7. 有效期:6個月


小鼠(Mouse)磷脂酶D(PLD)試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2. 靈敏度:最低檢測濃度小于1.0 U/L。

3. 檢測范圍:1.0 - 240 U/L。

4. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

5. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

6. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

7. 有效期:6個月


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